Przygotowanie próbki:
Zbiór próbek: Zbieraj próbki takie jak krew, tkanka, ślina i mocz zgodnie z celem eksperymentu.
Ekstrakcja DNA: Użyj dedykowanego zestawu ekstrakcji DNA do ekstrakcji DNA z próbki.
Przygotowanie reakcji PCR:
Startery projektowe: Projektuj specyficzne pary starterów oparte na sekwencji docelowej do amplifikacji szablonu DNA.
Przygotuj mieszaninę reakcyjną: w tym szablon DNA, startery, bufor, polimeraza DNA, DNTP (trifosforany deoksynukleozydowe), Mg 2+ itp.
Ustaw program PCR:
Ustawienia instrumentów PCR: Wprowadź ustalone parametry cyklu PCR, takie jak temperatura podgrzewania 95 stopni, temperatura denaturacji (taka jak 95 stopni), temperatura wyżarzania (taka jak 55 stopni), temperatura wydłużenia (np. 72 stopnie) i liczba cykli.
Reakcja PCR:
Dodaj próbkę: Dodaj mieszaninę reakcyjną do zbiornika reakcyjnego PCR lub chip, a każda próbka zwykle ma jedną dobrze reakcję.
Wykonaj PCR: cykle instrumentów PCR zgodnie z programem wstępnym, w tym etapów ogrzewania, chłodzenia, wyżarzania i przedłużania.
Analiza produktu:
Chłodzenie po wzmocnieniu: Po zakończeniu PCR próbka jest krótko chłodzona w 4 stopnie.
Separacja elektroforetyczna: Użyj technologii elektroforezy żelowej, takiej jak elektroforeza żelowa agarozowa, aby oddzielić produkty PCR o różnych długościach.
Skanowanie fluorescencyjne: Startery znakowane fluorescencyjnie emitują światło o określonej długości fali w wzmocnionym produkcie, a przyrząd PCR odczytuje te sygnały i rejestruje je.
Przetwarzanie i interpretacja danych:
Oprogramowanie do analizy danych: Użyj specjalistycznego oprogramowania do analizy sygnału fluorescencyjnego i obliczenia stężenia lub względnego stężenia docelowego fragmentu.
Interpretacja wyników: Na podstawie krzywej PCR i wartości wyjściowej ustal, czy PCR zakończy się powodzeniem, czy fragment docelowy istnieje i ile to jest.
Nagrywanie i zachowanie wyników:
Zapisz wyniki w raporcie eksperymentalnym i właściwie zachowaj oryginalne dane i próbki.